荧光样本制作所需材料

(一)载玻片

载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片要光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。

(二)盖玻片

盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。

(三)标本

组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。

(四)封裱剂

封裱剂常用甘油，要无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。

(五)镜油

一般暗视野荧光蜜桃传媒AV免费观看麻豆下载和用油镜观察标本时，要使用镜油，请使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。

荧光标本的制作方法：

样品须经过石蜡包埋切片，然后用铁矾苏木精染色，普通光镜观察效果还可以作荧光观察需用荧光染料DAPI染色，

石蜡切片的过程：

1. 取材：刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.

2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注意：(1). 固定液量应为组织块体积的40倍.

(2) 固定时间：固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3h-24h.

(3)固定温度：大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.

(4)固定容器：固定容器应大些.

3. 漂洗：流水冲洗2—10h.

4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→****(60-120’)→****(60-120’).

5. 透明: 组织块脱水后要经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.

6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.

7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面要平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.

8. 切片：修块→切片→展片→捞片→烤片.也可作冰冻切片.

荧光染料的配制：

储藏液：1mg/ml dapi(DMSO、去离子水、pbs都可以溶解)

工作液：通常1μg/ml

染色时须避光，10min左右

用pbs冲去多余染液即可观察